细胞培养(植物细胞培养应该具备哪些基本条件)
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2023-11-06
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1. 细胞培养,植物细胞培养应该具备哪些基本条件?
一、温度:对大多数植物组织20~28℃即可满足生长所需,其中26~27℃最适合。
二、光:
组织培养通常在散射光线下进行。光的影响可导致不同的结果,有些植物组织在暗处生长较好,而另一些植物组织在光亮处生长较好,但由愈伤组织分化成器官时,则每日必须要有一定时间的光照才能形成芽和根。有些次生物质的形成,光是决定性因素。
三、渗透压:渗透压对植物组织的生长和分化很有关系。在培养基中添加食盐、蔗糖、甘露醇和乙二醇等物质可以调整渗透压。通常1~2个大气压可促进植物组织生长,2个大气压以上时,出现生长障碍,6个大气压时植物组织即无法生存。
四、酸碱度:一般植物组织生长的最适宜ph为5~6.5。在培养过程中ph可发生变化,加进磷酸氢盐或二氢盐,可起稳定作用。
五、通气:悬浮培养中细胞的旺盛生长必须有良好的通气条件。小量悬浮培养时巨常转动或振荡,可起通气和搅拌作用。大量培养中可采用专门的通气和搅拌装置。
2. 为什么在细胞培养过程中要保证最大程度的无菌?
一种是考虑杂菌对细胞的污染,二是防止对培养基营养物质的消耗。
细胞培养液中的营养成分很高的,一般的的细菌长一代也就几十分钟,可是一般的细胞长一代要十多个小时,如果有细菌污染,还没等细胞长起来,培液中的营养成分就被细菌都消耗殆尽了,而其很多细菌生长的时候都会分泌内毒素,对细胞也有很大影响,所以细胞培养必须无菌操作
3. 为什么动物细胞培养时不需要脱分化?
首先,并非所有动物细胞都需要贴壁才能生长。可以悬浮生长的细胞包括部分间质干细胞和肿瘤细胞(尤其是血液系统肿瘤)等。而上皮类的细胞通常需要贴壁培养。
1、所谓“贴壁才能生长”有一个专业名词,叫“锚定依赖生长”(anchorage dependent growth)。许多动物细胞的体外培养,往往需要锚定在某种特殊的表面介质,包括细胞外基质提取物、多肽,及经过特殊处理的塑料、玻璃表面等,才能正常生长。否则,细胞会停止分裂,甚至死亡。
2、为什么这些细胞依赖于锚定?有几种假说: a)锚定的细胞能“摊开”形成一个大的表面,并将生长因子受体集中到一起,最大程度与生长因子结合,从而维持了细胞正常的活性。悬浮的细胞并非是完美的球形,而是会形成许多绒毛状的凸起,因此有些生长因子受体会被掩盖在较里层的空间,不利于和生长因子结合。尤其是上皮细胞具有极化的特点(细胞两端的分子分布不同,有所谓的顶端和底端之分),更加需要锚定才能生长。 b)上皮类细胞的生存与增殖,依赖于junction信号,如gap junction和tight junction等(中文可以翻译为缝隙连接和紧密连接)。而完整的junction功能结构,就包括了细胞外基质、细胞膜表面蛋白、细胞内骨架等几个基本要素。如果没有锚定在某个表面,这个junction信号通路就走不通,从而导致细胞周期阻滞、细胞死亡等后果。同时,相比3D悬浮生长,2D锚定生长还能显著缩短细胞之间的距离,从而更加有利于细胞-细胞之间的junction信号传导。 c)部分锚定依赖的细胞,其生存与增殖,还依赖于旁分泌信号。有细胞培养经验的人就知道,对于一些非转化的、锚定依赖生长细胞,假设细胞种植的密度太低,到最后往往就长不起来。这是因为细胞之间距离太远,旁分泌信号很难传递。甚至一些已经恶性转化的细胞,也会有类似的情况。
3、不是所有细胞都需要锚定才能生长。比如间质干细胞是一类非极化的细胞,它们可以悬浮培养。一些iPSC(诱导多能干细胞)和ESC(胚胎干细胞),也可以悬浮培养。一些恶性转化细胞,由于生长因子受体表达量升高、生长因子基因突变等原因,克服了悬浮生长时带来的压力,减少了对junction信号的依赖,甚至脱分化导致细胞极化减弱甚至消失,因此也可以悬浮培养。
4. 动物细胞培养根据培养基的不同分为哪两种方法?
天然培养基:
天然培养基主要取自动物体液或从动物组织分离提取。其优点是营养成分丰富,培养效果良好,缺点是成分复杂,来源受限。天然培养基/液的种类很多,包括生物性液体(如血清);组织浸液(如胚胎浸液);凝固剂(如血浆)等。如:胎牛血清
合成培养基:
合成培养基(synthetic medium),又称为组合培养基,是通过顺序加入准确称量的高纯度化学试剂与蒸馏水配制而成的,其所含的成分(包括微量元素在内)以及他们的量都是确切可知的。合成培养基一般用于实验室中进行的营养、代谢、遗传、鉴定和生物测定等定量要求较高的研究。比如:1640、DMEM
5. 动物细胞培养中十代之后细胞核型为何会改变?
基因发生改变。十代之前叫传代培养,十代之后一般不会再分裂,继续分解的细胞核型改变,发生癌变,癌变一定是原癌基因和抑癌基因发生基因改变。
6. 怎样理解动物组织解离后细胞的初次培养?
动物细胞培养过程中,悬液中分散的细胞贴附在瓶壁上,称为细胞贴壁;当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖,称为接触抑制;人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养,贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理,然后分瓶继续培养,让细胞继续增殖,这种培养过程称为传代培养。
7. 癌细胞体外培养需要什么条件?
谢谢邀请。 做医学科研经常需要培养癌细胞。培养癌细胞其实与培养普通细胞差不多,都是需要培养基(保证细胞生长繁殖需要的各种营养物质和水,以及维生素和矿物质),合适的生长温度,模拟体内生长的氧气和二氧化碳比例,另外需要无菌和无粉尘条件,一般都是在专门的实验室进行这项工作。 不知这样回答是否能满足你的要求。
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1. 细胞培养,植物细胞培养应该具备哪些基本条件?
一、温度:对大多数植物组织20~28℃即可满足生长所需,其中26~27℃最适合。
二、光:
组织培养通常在散射光线下进行。光的影响可导致不同的结果,有些植物组织在暗处生长较好,而另一些植物组织在光亮处生长较好,但由愈伤组织分化成器官时,则每日必须要有一定时间的光照才能形成芽和根。有些次生物质的形成,光是决定性因素。
三、渗透压:渗透压对植物组织的生长和分化很有关系。在培养基中添加食盐、蔗糖、甘露醇和乙二醇等物质可以调整渗透压。通常1~2个大气压可促进植物组织生长,2个大气压以上时,出现生长障碍,6个大气压时植物组织即无法生存。
四、酸碱度:一般植物组织生长的最适宜ph为5~6.5。在培养过程中ph可发生变化,加进磷酸氢盐或二氢盐,可起稳定作用。
五、通气:悬浮培养中细胞的旺盛生长必须有良好的通气条件。小量悬浮培养时巨常转动或振荡,可起通气和搅拌作用。大量培养中可采用专门的通气和搅拌装置。
2. 为什么在细胞培养过程中要保证最大程度的无菌?
一种是考虑杂菌对细胞的污染,二是防止对培养基营养物质的消耗。
细胞培养液中的营养成分很高的,一般的的细菌长一代也就几十分钟,可是一般的细胞长一代要十多个小时,如果有细菌污染,还没等细胞长起来,培液中的营养成分就被细菌都消耗殆尽了,而其很多细菌生长的时候都会分泌内毒素,对细胞也有很大影响,所以细胞培养必须无菌操作
3. 为什么动物细胞培养时不需要脱分化?
首先,并非所有动物细胞都需要贴壁才能生长。可以悬浮生长的细胞包括部分间质干细胞和肿瘤细胞(尤其是血液系统肿瘤)等。而上皮类的细胞通常需要贴壁培养。
1、所谓“贴壁才能生长”有一个专业名词,叫“锚定依赖生长”(anchorage dependent growth)。许多动物细胞的体外培养,往往需要锚定在某种特殊的表面介质,包括细胞外基质提取物、多肽,及经过特殊处理的塑料、玻璃表面等,才能正常生长。否则,细胞会停止分裂,甚至死亡。
2、为什么这些细胞依赖于锚定?有几种假说: a)锚定的细胞能“摊开”形成一个大的表面,并将生长因子受体集中到一起,最大程度与生长因子结合,从而维持了细胞正常的活性。悬浮的细胞并非是完美的球形,而是会形成许多绒毛状的凸起,因此有些生长因子受体会被掩盖在较里层的空间,不利于和生长因子结合。尤其是上皮细胞具有极化的特点(细胞两端的分子分布不同,有所谓的顶端和底端之分),更加需要锚定才能生长。 b)上皮类细胞的生存与增殖,依赖于junction信号,如gap junction和tight junction等(中文可以翻译为缝隙连接和紧密连接)。而完整的junction功能结构,就包括了细胞外基质、细胞膜表面蛋白、细胞内骨架等几个基本要素。如果没有锚定在某个表面,这个junction信号通路就走不通,从而导致细胞周期阻滞、细胞死亡等后果。同时,相比3D悬浮生长,2D锚定生长还能显著缩短细胞之间的距离,从而更加有利于细胞-细胞之间的junction信号传导。 c)部分锚定依赖的细胞,其生存与增殖,还依赖于旁分泌信号。有细胞培养经验的人就知道,对于一些非转化的、锚定依赖生长细胞,假设细胞种植的密度太低,到最后往往就长不起来。这是因为细胞之间距离太远,旁分泌信号很难传递。甚至一些已经恶性转化的细胞,也会有类似的情况。
3、不是所有细胞都需要锚定才能生长。比如间质干细胞是一类非极化的细胞,它们可以悬浮培养。一些iPSC(诱导多能干细胞)和ESC(胚胎干细胞),也可以悬浮培养。一些恶性转化细胞,由于生长因子受体表达量升高、生长因子基因突变等原因,克服了悬浮生长时带来的压力,减少了对junction信号的依赖,甚至脱分化导致细胞极化减弱甚至消失,因此也可以悬浮培养。
4. 动物细胞培养根据培养基的不同分为哪两种方法?
天然培养基:
天然培养基主要取自动物体液或从动物组织分离提取。其优点是营养成分丰富,培养效果良好,缺点是成分复杂,来源受限。天然培养基/液的种类很多,包括生物性液体(如血清);组织浸液(如胚胎浸液);凝固剂(如血浆)等。如:胎牛血清
合成培养基:
合成培养基(synthetic medium),又称为组合培养基,是通过顺序加入准确称量的高纯度化学试剂与蒸馏水配制而成的,其所含的成分(包括微量元素在内)以及他们的量都是确切可知的。合成培养基一般用于实验室中进行的营养、代谢、遗传、鉴定和生物测定等定量要求较高的研究。比如:1640、DMEM
5. 动物细胞培养中十代之后细胞核型为何会改变?
基因发生改变。十代之前叫传代培养,十代之后一般不会再分裂,继续分解的细胞核型改变,发生癌变,癌变一定是原癌基因和抑癌基因发生基因改变。
6. 怎样理解动物组织解离后细胞的初次培养?
动物细胞培养过程中,悬液中分散的细胞贴附在瓶壁上,称为细胞贴壁;当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖,称为接触抑制;人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养,贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理,然后分瓶继续培养,让细胞继续增殖,这种培养过程称为传代培养。
7. 癌细胞体外培养需要什么条件?
谢谢邀请。 做医学科研经常需要培养癌细胞。培养癌细胞其实与培养普通细胞差不多,都是需要培养基(保证细胞生长繁殖需要的各种营养物质和水,以及维生素和矿物质),合适的生长温度,模拟体内生长的氧气和二氧化碳比例,另外需要无菌和无粉尘条件,一般都是在专门的实验室进行这项工作。 不知这样回答是否能满足你的要求。
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